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質(zhì)粒的提取是基因工程中至關(guān)重要的一步。在眾多質(zhì)粒提取方法中,堿裂解法最為常用。其實(shí)驗(yàn)步驟如下:
1.加1.5mL培養(yǎng)的菌液于離心管中,12000rpm離心30s。
2.去上清,加入冰的200μL溶液I,劇烈震蕩,室溫放置3min。
3.加入300μl溶液II,顛倒數(shù)次,冰浴3min。
4.加入冰的400μl溶液III,輕輕顛倒混勻,冰浴5min,12000rpm離心5min。
5.過柱純化……某同學(xué)在實(shí)驗(yàn)過程中觀察到加入溶液I、II、III后,依次出現(xiàn)溶液渾濁、溶液漸漸澄清、出現(xiàn)大量絮狀沉淀三種現(xiàn)象。
據(jù)此推測,下列說法正確的是()
A.溶液I為等滲溶液,含有Tris緩沖液和EDTA/主要作用是重懸菌體和防止DNA降解
B.溶液II為裂解液,在SDS和NaOH的聯(lián)合作用下裂解細(xì)胞,同時(shí)另DNA變性,便于之后沉淀
C.溶液III為酸性溶液,SDS與酸反應(yīng)生成不溶性沉淀,同時(shí)沉淀被SDS結(jié)合的基因組DNA
D.溶液III中的酸主要作用是與堿中和,使蛋白質(zhì)達(dá)到等電點(diǎn)而沉淀析出
A.樣品溶解性較差
B.樣品中有不溶顆粒
C.凝膠底部有氣泡
D.鹽離子濃度過高
E.電極不平衡
A.超聲波破碎能量較大,所以需要間歇性停止,多次反復(fù)
B.溫度差破碎法凍融過程會使酶變性,但仍可較好地提取動植物細(xì)胞中的糖類物質(zhì)
C.壓力差破碎法因需添加較多低滲物質(zhì),溶劑量大,提取物損失亦大
D.除了溫度差破碎法,另外兩種方法均可提取胞內(nèi)活性蛋白質(zhì)
E.使用壓力差破碎法時(shí),須先用酶解組織成為單細(xì)胞,不然效果較差